Biotecnología aplicada: Western blot detección y cuantificación de proteínas naturales y recombinantes

Descripción del curso

En el siguiente curso se abordarán las bases teóricas y los aspectos prácticos de la técnica de Western-blot. Se discutirán a profundidad las diferentes etapas del método, enfatizando sobre los puntos claves en cada una de ellas que garantizan un resultado exitoso. Se realizarán ejercicios con la finalidad de desarrollar habilidades prácticas que permitan al asistente ejecutar un Western-Blot en el laboratorio, así como solucionar posibles inconvenientes que puedan presentarse durante su ejecución. Se discutirá acerca de las aplicaciones de esta técnica en diferentes ramas de las ciencias biológicas, biomédicas y afines.

Temario

1. Introducción

1.1 Conceptos generales de las proteínas.

1.2 Conceptos básicos de inmunología: antígenos y anticuerpos.

1.3 Uso de herramientas bioinformáticas para la predicción de epítopes de células. B (Ejercicio: Predicción de epítopes usando servidores web y bases de datos).

2. Preparación de muestras de proteínas

2.1 Métodos de extracción de proteínas.

2.2 Clarificación de la muestra.

2.3 Cuantificación de la muestra (Ejercicio: Cuantificación de proteínas).

3. Electroforesis de proteínas y transferencia a membranas

3.1 SDS-PAGE.

3.2 Electroforesis nativa.

3.3 Isoelectroenfoque (IEF).

3.4 Electroforesis Bidimensional (Ejercicio: Problemas comunes al realizar electroforesis).

3.5 Métodos de tinción

3.6 Métodos de transferencia a membrana

4. Sondeo con Anticuerpos y detección

4.1 Anticuerpos primarios y secundarios.

4.2 Eliminación de anticuerpos y re-sondeo.

4.3 Métodos de detección (Colorimétricos, Fluorescencia, Quimioluminiscencia).

4.4 Multiplex Western-Blot

5. Captura y análisis de imágenes

5.1 Digitalización de imágenes.

5.2 Western-blot cualitativo.

5.3 Western-blot cuantitativo.

5.4 Programas para análisis de imágenes (Ejercicio: Análisis de imágenes con ImageJ).

6. Aplicaciones del Western-Blot

6.1 Detección de proteínas recombinantes.

6.2 Cuantificación de proteínas.

6.3 Inmunoproteómica.

6.4 Ejercicio: Establecer y optimizar un protocolo de Western-Blot.